实验误差分析
一、假阴性，不出现扩增条带：
- 模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有 Taq 酶抑制剂，③模板中蛋白质没有
消化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。
⑤模板核酸变性不彻底。在酶和引物质量好时，不出现扩增带，极有可能是标本的
消化处理，模板核酸提取过程出了毛病，因而要配制有效而稳定的消化处理液，其
程序亦应固定不宜随意更改。 - 酶失活：需更换新酶，或新旧两种酶同时使用，以分析是否因酶的活性丧失或不够
而导致假阴性。 - 引物：引物质量、引物的浓度、两条引物的浓度是否对称，是 PCR 失败或扩增条
带不理想、容易弥散的常见原因。 - Mg2+
浓度：Mg2+
离子浓度对 PCR 扩增效率影响很大，浓度过高可降低 PCR 扩增的
特异性，浓度过低则影响 PCR 扩增产量甚至使 PCR 扩增失败而不出扩增条带。
二、假阳性 ，出现的 PCR 扩增条带与目的靶序列条带一致，有时其条带更整齐，
亮度更高：
- 引物设计不合适：选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性，因而在进行 PCR
扩增时，扩增出的 PCR 产物为非目的性的序列。靶序列太短或引物太短，容易出
现假阳性。需重新设计引物。 - 靶序列或扩增产物的交叉污染：可能存在整个基因组或大片段的交叉污染，导致假
阳性。
三、出现非特异性扩增带 ：
PCR 扩增后出现的条带与预计的大小不一致，或大或小，或者同时出现特异性扩
增带与非特异性扩增带。非特异性条带的出现，其原因：
- 引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体。二是 Mg2+离子浓度过
高、退火温度过低，及 PCR 循环次数过多有关。 - 酶的质和量，往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶则不出现，
酶量过多有时也会出现非特异性扩增。
四、出现片状拖带或涂抹带
实验中出现涂抹带或片状带或地毯样带。其原因： - 由于酶量过多或酶的质量差
- dNTP 浓度过高
- Mg2+浓度过高
- 退火温度过低
- 循环次数过多
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